
Las características del semen a tener en cuenta en su evaluación microscópica son: motilidad (en masa e individual), vigor, concentración de los espermatozoides y morfología de estos.
La motilidad y la morfología se pueden valorar mediante un microscopio; antes de ello es necesario realizar una dilución del semen a fin de observar los movimientos de los espermatozoides de una forma más clara. Esta evaluación debe realizarse cuanto antes, para que el semen no pierda sus condiciones óptimas para la fertilización.
Para determinar la Motilidad en Masa Microscópica (MMMi), se coloca una gota del semen puro sobre un portaobjetos atemperado a 36‑37°C, sobre una platina térmica de microscopio, y se lo observa a 40 aumentos (estereomicroscopio), evaluando la presencia de ondas omega. Se debe evaluar cerca del borde de la gota, en donde la profundidad de la misma es menor y es más fácil de observar. La escala que se toma es de 1 a 5, calificando como 1al semen que no presenta ondas, y 5 cuando las ondas se mueven rápidamente formando remolinos. Dentro de esos parámetros, se consideran los puntos intermedios. Se considera como valor mínimo de aceptación 3 de MMMi.
La motilidad individual (MI) se determina diluyendo el semen en citrato de sodio. Se coloca una gota gruesa de semen en un tubo con unos 2 ml de la solución de citrato, que debe estar a la misma temperatura del semen, ya en el baño María. Una vez diluido el semen, se extrae una gota de la dilución y se la coloca sobre un portaobjetos atemperado a 36‑37º C y se coloca sobre esta un cubreobjetos, también a la misma temperatura. Se observa al microscopio, si es posible sobre platina térmica. Se debe observar un campo y valorar subjetivamente los espermatozoides que se mueven en forma rectilínea progresiva, siendo estos los que atraviesan el campo de observación. Los espermatozoides que giran en círculo o avanzan en forma oscilatoria se consideran de movimientos anormales. El porcentaje que se indica es el de los espermatozoides con movimiento rectilíneo progresivo del total de espermatozoides aceptados, siendo el valor mínimo aceptable del 50 %.
—MB (muy buena) = 80-100% de células móviles.
—B (buena) = 60-79%.
—R (regular) = 40-59%.
—P (pobre) = menos de 40%.
El vigor se valora al mismo tiempo que la MI, teniendo en cuenta la velocidad con la que estos espermatozoides atraviesan el campo. La escala que se utiliza es de 0 a 4, calificando como 0 los espermatozoides inmóviles, y como 4 los que avanzan rápidamente por el campo y son difíciles de seguir visualmente. Dentro de estos parámetros, se consideran los puntos intermedios. Se considera como valor mínimo aceptable un vigor de 3.
La concentración de espermatozoides de un eyaculado consiste en la determinación del número de espermatozoides por unidad de volumen, ya que es fundamental para el análisis seminal ‑las dosis seminales se preparan en función de la concentración del volumen‑. La determinación de la concentración se hace utilizando cámaras de recuento, como la cámara de Búrker o Neubauer, y un contador de glóbulos rojos, en donde se prepara la dilución con citrato de formalina. Además de servir para calcular la concentración espermática, esta cámara se utiliza para hacer el recuento de las anomalías morfológicas, tanto en la cabeza como en la cola del espermatozoide.
La valoración de la morfología (coloración vital, morfología sensu stricto y acrosomía) de los espermatozoides se hace mediante la observación de preparaciones microscópicas o frotis. En ellas, se puede apreciar si la morfología observada es la adecuada o si existen en la preparación elementos extraños, con lo cual se pueden detectar problemas de fertilidad cuando el porcentaje de formas anormales es elevado (figs. 50, 51, 52 y 53).

Fig. 50. Espermatozoides de pintada agregados en torno a células epiteliales y glóbulo rojo; obsérvese también la presencia de formas anormales (tinción panóptico rápido).

Fig. 51. Agregado de espermatozoides en torno a células epiteliales (panóptico rápido).

Fig. 52. Presencia de sangre (glóbulos rojos) en esperma de pintada (panóptico rápido).

Fig. 53. Agregado de espermatozoides en torno a restos de suciedad presentes en el semen de gallos de pintada; obsérvese también agregado en torno a glóbulo rojo (panóptico rápido).